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如何正確使用ELISA板進行實驗?
以下是ELISA板正確使用的實驗指南,本生結合關鍵操作要點和常見問題解決方案:
一、實驗前準備
板選擇與處理?
優(yōu)先選用聚苯乙烯材質96孔板(吸附性能均衡),新板需用去離子水沖洗去除雜質?
包前用碳酸鹽緩沖液(pH 9.6)平衡,避免溫差導致板變形
試劑配制?
標準品需現配現用,凍存樣本避免反復凍融(建議分裝保存)
封閉液推薦5% BSA-PBST(含0.05%吐溫20),37℃預溫30分鐘
二、核心操作步驟
包被與封閉?
抗原/抗體包被濃度1-10 μg/mL,100μL/孔,4℃過夜或37℃ 2小時?
封閉液需覆蓋孔底,37℃孵育1小時,拍干時避免殘留液體
加樣與孵育?
樣本與標準品同步加樣,避免邊緣效應(邊緣孔可加PBS緩沖)
37℃孵育時用保鮮膜封板,每10分鐘輕震混勻一次
三、關鍵質控點
洗滌規(guī)范?
手工洗板需拍干后立即加洗滌液,機器洗板需檢查針頭通暢性
洗滌次數3-5次,最后一次拍干后30秒內加下一試劑
顯色控制?
TMB避光孵育時間需預實驗確定(通常10-20分鐘)
終止液加入后15分鐘內讀數,雙波長檢測(450/630nm)
四、常見問題處理
高背景?:增加洗滌次數至5次,或更換封閉液為5%脫脂奶粉?
板間差異?:同一實驗使用同一批次板,加樣時使用多通道移液器
注:具體參數需根據試劑盒說明書調整,建議每板設置陰陽性對照及標準曲線(R2>0.99)。
注:以上僅供參考,不作為實際數據,實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。
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